實驗室質控菌株複蘇保存相關常見問答
發布時間：2019-11-27 瀏覽次數：6271
微生物實驗室如果從事致病菌檢測、培養基質控驗收、方法驗證等相關工作，就應該備有質控菌株。實驗室需對使用的質控菌株進行規範性管理，以便有效地、安全地使用，保證實驗結果的準確性，今天環凱為大家總結了實驗室質控菌株複蘇保存過程中常見的問題。
1. 菌株保存的是第三代，-80℃保存，再取出來活化的話屬於第幾代？
答：保存的是第三代複活出來後，如果采用平板或肉湯活化相當於轉接了一代，就是第四代了，如果還在瓷珠裏的話就還是原來的代數。如果是保存在斜麵上，這一支斜麵一直就是第三代，如果轉接到另一支斜麵就是第四代了。傳代原則，菌株活化複蘇不論以任何形式繁殖了一次就算是傳了一代。但如果僅是物理位置的轉移沒有繁殖就不是傳代，需要注意。
2. 菌株傳代保存到瓷珠裏一定要挑單菌落嗎？
答：不一定非挑單菌落，但是一定要挑相同特征的菌落，就是說從同一個菌落純化出來的，以保證它們的特性完全一致。原則是盡量多挑，寧多勿少。
3. 菌株冷凍保存是-70℃還是-80℃有具體標準規定麼？
答：其實是有標準的，《SN/T 2632-2010 微生物菌株常規保藏技術規程》是關於菌株保藏的一個標準，大家可以學習一下，各個保存方式都有介紹，但是瓷珠是比較新興的保存方式暫時裏麵還沒有收錄。
4. 怎樣延長質控菌株的保存時間呢？
答：大量的實驗證明質控菌株在低溫、幹燥、缺氧、缺營養的條件下保存效果是最好的，越接近這種保存條件，菌株的保存時間越長。
5. 怎樣純化質控菌株？
答：純化就是從TSA上或別的非選擇性平板上轉挑取單菌落劃線再分離出單菌落，這就相當於純化了。
6. 我們隻保存第一代菌株是不是要重新傳代保存呢，認證老師會不會認為這是個錯誤？
答：應該不會，認證老師不會提出這種問題的，不過最好是第一代菌株保存一些、第二代菌株保存一些，使用時工作菌株最好使用第三代菌株，第一代菌株可作為長期保存用。
7. 為何要將第三代作為工作菌株？
答：多傳代幾次後菌株的活力會明顯提高，但最多傳代到第五代後就不能用了，因為第五代後菌株雖然不會完全變異，但變異率會明顯增加，因此選用第三代作為工作菌株是比較合適的，若使用第一、第二代菌株活力沒有那麼強。
8. 質控菌株是不是傳代超過五代就必須銷毀處理？
答：不一定。傳代超過五代隻是存在菌種變異可能，但如果傳代到第六代、第七代……，經過形態、生化特性、DNA特征等驗證，性狀保持穩定，那麼這些五代後的菌還是可以正常使用。
9. 菌種編號意義？
答：以金黃色葡萄球菌CMCC（B）26003為例CMCC為中國醫學菌種保藏中心縮寫，其它常見菌種保藏中心還包括ATCC（美國標準菌種收藏所）、CICC（工業微生物菌種保藏中心）、FSCC（食品安全菌種保藏中心）；B的意思是細菌，對應還有F（真菌）；26003為CMCC的保藏編號。
10. 同樣是金黃色葡萄球菌，ATCC6538與ATCC25923有什麼不同？
表明其來源不同，生化特性有也有所不同。比如ATCC6538溶血能力較ATCC25923要強。
11. 使用磁珠保藏管保存質控菌株，加入菌液搖勻後為什麼要吸幹菌液？
防止剩餘菌液冷凍後形成冰晶損傷保存的菌株。
12. TSA斜麵一般多少度保存，可以放在冷藏裏嗎？
2-8℃保存，放在冷藏是可以的；注意弧菌和綠膿杆菌要放到室溫20-25℃保存，否則會很快死亡。
13. 複蘇凍幹質控菌株是否可以采用液體培養基？
答：可以，但建議使用平板培養基複蘇凍幹菌株。有助於分辨複蘇出來菌株是否有汙染，同時可初步觀察菌落形態以鑒定菌株純度。使用液體複蘇的話隻能觀察到培養基混濁，無法確定是否有汙染。
14. 複蘇凍幹質控菌株是否可以采用顯色培養基？
答：不建議采用顯色培養基複蘇凍幹菌株。凍幹菌株複蘇需要一個最適生長環境，複蘇培養基不能選用選擇性培養基或顯色培養基，這些培養基裏麵含有抑菌成分不利於菌株複蘇。
15. 產氣莢膜梭菌做凍存時是否需要保持厭氧狀態？
答：不需要，產氣莢膜梭菌雖屬厭氧性細菌，但對厭氧程度要求並不太嚴格，按照一般菌株凍存方法進行凍存即可。
